Micro December 2018

(Svenska) SV

Provberedning 1. Använd lämpliga sterila spädningsmedel:

Butterfields fosfatbuffrat utspädningsvatten, 0,1 % peptonvatten, peptonsaltutspädningsmedel (maximalt återvinningsdämpningsmedel), buffrat peptonvatten, 0,85 – 0,9 % saltlösning, fosfatbuffrad saltlösning (PBS), destillerat vatten eller bisulfitfri letheenlösning. Använd inte spädningsmedel som innehåller citrat, bisulfit eller tiosulfat tillsammans med 3M Petrifilm REC Plate då dessa ämnen kan hämma tillväxt. Om citratbuffert indikeras i standardproceduren ska den ersättas med Butterfields fosfatbuffrat vatten, uppvärmt till 40 till 45 ºC. 2. Blanda eller homogenisera provet. 3. För optimal tillväxt och återfinnande av mikroorganismer i sura produkter (< pH 5) ska pH-värdet på det utspädda provet justeras till ett värde över pH 5. För sura prover ska pH justeras med 1N NaOH. Applicering på platta 1. Placera 3M Petrifilm REC Plate på en plan och jämn yta. 2. Lyft den övre filmen, håll pipetten vinkelrätt mot ympningsytan och dispensera 1 ml provsuspension på mitten av den undre filmen. 3. Använd en rullande rörelse vid placering av den övre filmen på provet för att förhindra att luftbubblor bildas. 4. Placera 3M™ Petrifilm™ spridarplattan (6425) med den platta sidan nedåt på mitten av plattan. Tryck försiktigt på mitten av spridaren för att fördela provet jämnt. Sprid inympningsämnet över hela tillväxtområdet på 3M Petrifilm REC Plate innan gelen bildas. Dra inte spridarplattan över filmen. 5. Avlägsna 3M Petrifilm spridarplattan och lämna odlingsplattan orörd i minst en minut för att låta gelen bildas. Inkubering Inkubera 3M Petrifilm REC Plate i horisontellt läge, med den genomskinliga sidan uppåt, i staplar om högst 20 plattor. Flera inkubationstider och -temperaturer kan användas beroende på lokala referensmetoder. Inkubera 3M Petrifilm REC Plate i 18 till 24 timmar vid 32 °C (mjölkprodukter), 35 °C eller 42 °C. Tolkning 1. 3M Petrifilm REC Plate kan avläsas med en vanlig koloniräknare eller annat lampförsett förstoringsinstrument. Räkna ej kolonier utanför odlingsytan då dessa ej har utsatts för mediets selektiva inverkan. Räkna inte artefakter i form av luftbubblor. 2. Tolkning av E. coli -kolonier sker enligt följande: Räkna blå till blågröna kolonier med och utan gas, oavsett storlek och färgintensitet, enligt bekräftade E. coli - bakterier. W VARNING Använd inte denna platta för specifik detektering av E. coli O157. Eftersom de flesta E. coli O157-stammar är atypiska (de är exempelvis glukuronidasnegativa och producerar inte en blågrön färg) kommer de inte att identifieras på 3M Petrifilm REC Plate. 3. Andra koliforma kolonier är röda och nära förenade (inom en kolonidiameter) med gasbubbla. Kolonier utan gasbubbla (som har ett större avstånd mellan koloni och gasbubbla än en kolonidiameter) räknas inte som koliforma. Det sammanlagda koliforma antalet består av både röda kolonier med gas och blå kolonier med och utan gas. 4. Kvantifierbart intervall: a. Det kvantifierbara intervallet för E. coli på 3M Petrifilm REC Plate är mindre än eller lika med 100 blå till blågröna kolonier med och utan gas oavsett antal kolonier. b. Det kvantifierbara intervallet för totala koliformer på 3M Petrifilm REC Plate är mindre än eller lika med 100 kolonier. c. Det kvantifierbara intervallet för E. coli eller totala koliformer kan förekomma på separata spädningar. Den runda odlingsytan är ca 30 cm 2 . Uppskattningar kan göras på 3M Petrifilm REC Plate med mer än 100 kolonier. Räkna antalet kolonier på en eller flera representativa rutor och avgör det genomsnittliga antalet per ruta. Multiplicera genomsnittligt antal med 20 för att fastställa uppskattat antal per 3M Petrifilm REC Plate.

3