Micro December 2018

(Suomenkielinen) FI

Näytteen valmistus 1. Käytä sopivaa steriiliä laimenninta:

Butterfieldin fosfaattipuskuroitu laimennusvesi, 0,1 % peptonivesi, peptonisuolalaimenne (Maximum Recovery laimenne), puskuroitu peptonivesi, 0,85 %-0,9 % suolaliuos, fosfaattipuskuroitu suolaliuos (PBS), tislattu vesi tai bisulfiittivapaa Letheen alusta. Älä käytä 3M Petrifilm REC kasvatusalustoiden kanssa laimentimia, jotka sisältävät sitraattia, bisulfaattia tai tiosulfaattia, sillä ne voivat estää kasvua. Jos sitraattipuskuri on indikoitu vakiomenettelyssä, korvaa se Butterfieldin fosfaattipuskuroidulla laimennusvedellä lämmitettynä 40–45 ºC:n lämpötilaan. 2. Sekoita tai homogenisoi näyte. 3. Jotta happamien (< pH 5) näytteiden mikro-organismit voivat kasvaa ja toipua kunnolla, säädä näytesuspension pH korkeammaksi kuin pH 5. Jos näyte on hapan, säädä pH-arvoa 1N NaOH -liuoksella. Kasvatusalustaan asettaminen 1. Aseta 3M Petrifilm REC kasvatusalusta tasaiselle pinnalle vaakatasoon. 2. Nosta päällikalvo ja annostele 1 ml näytesuspensiota pohjakalvon keskelle pitämällä pipettiä kohtisuorassa inokulointialueeseen nähden. 3. Estä ilmakuplien syntyminen kiertämällä päällyskalvo näytteen päälle. 4. Aseta 3M™ Petrifilm™ litteä levitin (6425) tasainen puoli alaspäin kasvatusalustan keskelle. Levitä näyte tasaisesti painamalla varovasti levittimen keskeltä. Levitä inokulaattia 3M Petrifilm REC kasvatusalustan koko kasvualueelle ennen kuin geeli jähmettyy. Älä vedä levitintä kalvoa pitkin. 5. Poista 3M™ Petrifilm™ litteä levitin ja jätä -kasvatusalusta rauhaan vähintään 1 minuutin ajaksi, jotta geeliytyminen ehtii tapahtua. Inkubointi Inkuboi 3M Petrifilm REC kasvatusalustat vaakasuorassa asennossa kirkas puoli ylöspäin enintään 20 alustan pinoissa. Useita inkubointiaikoja ja lämpötiloja voidaan käyttää paikallisista menetelmäohjeista riippuen. Inkuboi 3M Petrifilm REC kasvatusalustoja 18–24 tunnin ajan 32 ºC:n (meijerituotteet), 35 ºC:n tai 42 ºC:n lämpötilassa. Tulkinta 1. 3M Petrifilm REC kasvatusalustat voidaan laskea tavallisella pesäkelaskurilla tai muulla valaistulla suurennuslasilla. Älä laske vaahdon pinnalla olevia pesäkkeitä, sillä elatusaineen selektiivinen vaikutus ei kohdistu niihin. Älä laske mahdollisia ihmiskäden aikaansaamia kuplia. 2. E. coli -pesäkkeet tulkitaan seuraavasti: Siniset tai sinivihreät pesäkkeet kaasulla tai ilman ja riippumatta niiden koosta tai värin intensiteetistä, lasketaan vahvistetuiksi E. coli -pesäkkeiksi. W VAROITUS Älä käytä tätä kasvatusalustaa erityiseen E. coli O157 -tunnistukseen. Koska useimmat E. coli O157 -kannat ovat epätyypillisiä, esimerkiksi glukuronidaasi-negatiivisia, ne eivät tuota sinistä väriä, joten niitä ei tunnisteta 3M Petrifilm REC kasvatusalustoissa. 3. Muut koliformipesäkkeet ovat punaisia ja niiden yhteydessä (enintään yhden pesäkkeen halkaisijan etäisyydellä) on kaasukupla. Pesäkkeitä, joiden yhteydessä ei esiinny kaasukuplaa (pesäkkeen ja kaasukuplan etäisyys >1 pesäkkeen läpimitta), ei lasketa koliformeiksi. Koliformien laskennassa huomioidaan yhteensä sekä punaiset pesäkkeet, joissa on kaasua, että siniset pesäkkeet, joissa on tai ei ole kaasua. 4. Laskentaväli: a. Laskentaväli E. colille 3M Petrifilm REC kasvatusalustoilla on enintään 100 sinistä tai sinivihreää pesäkettä kaasulla tai ilman, riippumatta pesäkkeiden kokonaislukumäärästä.

b. Laskentaväli koliformeille 3M Petrifilm REC kasvatusalustoilla on enintään 100 pesäkettä. c. Laskentaväli E. colille tai kokonaiskoliformimäärälle voi ilmetä erillisissä laimenteissa.

Pyöreä kasvualue on kooltaan noin 30 cm 2 . Arviointeja voidaan tehdä 3M Petrifilm REC kasvatusalustoilla, jotka sisältävät yli 100 pesäkettä. Laske pesäkkeiden lukumäärä yhdessä tai useammassa edustavassa neliössä ja määrittele keskimääräinen lukumäärä neliötä kohden. Määritä 3M Petrifilm REC -kasvatusalustan arvioitu määrä kertomalla keskiarvo luvulla 30.

3