Micro December 2018

(Türkçe) TR Butterfield’s fosfat tamponlanmış seyreltme suyu, %0,1 peptonlu su, pepton tuz seyrelticisi (Maksimum Geri Kazanım Seyrelticisi), tamponlanmış pepton suyu, %0,85-%0,9 salin, fosfat tamponlanmış salin (PBS), seyreltilmiş su veya bisülfitsiz Letheen Broth. Üremeyi inhibe edebileceğinden, 3M Petrifilm REC Plakası ile sitrat, bisülfit veya tiyosülfat içeren seyrelticiler kullanmayın. Standart prosedürde sitratlı tampon belirtilmişse, 40-45°C'ye kadar ısıtılan Butterfield’s fosfatla tamponlanmış seyreltme suyu ile değiştirin. 2. Numuneyi karıştırın veya homojenize edin. 3. Mikroorganizmaların asidik ürünlerde (< pH 5) uygun şekilde üremesi ve geri kazanımı için, numune süspansiyonu pH'ını pH 5'ten yüksek bir pH değerine ayarlayın. Asidik ürünler için pH'ı 1N NaOH ile ayarlayın. Plaka İnokülasyonu 1. 3M Petrifilm REC Plakasını düz, eğimsiz bir yüzeye yerleştirin. 2. Üst filmi kaldırın ve inokülasyon alanına dik konumda tutulan bir pipet kullanarak, alt filmin ortasına 1 mL numune süspansiyonu uygulayın. 3. Hava kabarcığı oluşmasını önlemek için üst film tabakasını numunenin üstüne yuvarlayarak yerleştirin. 4. 3M™ Petrifilm™ Düz Dağıtıcı’yı (6425) düz tarafı plakanın ortasında aşağı bakacak biçimde yerleştirin. Numuneyi eşit şekilde dağıtmak için dağıtıcının ortasına hafifçe bastırın. Jel oluşmadan önce inokülümü 3M Petrifilm REC Plakasının tüm üreme alanına yayın. Dağıtıcıyı tabakanın üzerinde kaydırmayın. 5. 3M Petrifilm Düz Dağıtıcı’yı kaldırın ve plakayı hiç kıpırdatmadan en az bir dakika kadar jelin oluşmasını bekleyin. İnkübasyon 3M Petrifilm REC Plakalarını, yatay bir konumda, şeffaf kısmı yukarı bakacak şekilde ve üst üste 20 taneden fazla koymadan inkübe edin. Geçerli yerel referans yöntemlerine göre birkaç inkübasyon zamanı ve sıcaklığı kullanılabilir. 3M Petrifilm REC Plakalarını 32°C (süt ürünleri), 35°C veya 42°C’de 18 ila 24 saat inkübe edin. Yorumlama 1. 3M Petrifilm REC Plakaları, standart bir koloni sayacı veya başka bir aydınlatmalı büyüteç kullanılarak sayılabilir. Köpük seti üzerindeki koloniler ortamın seçici etkisinden çıktığı için bunları saymayın. Yapay oluşmuş kabarcık varsa, bunları saymayın. 2. E. coli kolonileri aşağıdaki gibi yorumlanır: Rengi mavi ile mavi-yeşil arasında olan gazlı ve gazsız kolonileri, boyutu veya renk yoğunluğu ne olursa olsun onaylı E. coli olarak sayın. W UYARI Bu plakayı, özel E. coli O157 tespiti için kullanmayın. Birçok E. coli O157 suşu atipik olduğu için, örneğin glukronidaz negatif olduklarından, mavi renk oluşturmaz ve bu nedenle 3M Petrifilm REC Plakalarında koliformlar olarak tespit edilir. 3. Diğer koliform kolonileri kırmızıdır ve sıkışmış gazla (bir koloni çapı içerisinde) yakından ilişkilidir. Gazla ilişkili olmayan koloniler (koloni ve gaz kabarcığı arasında bir koloni çapından daha fazla mesafe) koliform bakteri olarak sayılmaz. Toplam koliform sayısı, hem gazlı kırmızı kolonileri hem de gazlı ve gazsız mavi kolonileri içerir. 4. Sayılabilir Aralık: a. 3M Petrifilm REC Plakasında E. coli için sayım aralığı, toplam kolonilerin sayısı ne olursa olsun rengi mavi ile mavi-yeşil arasında olan gazlı ve gazsız 100 koloniden az veya bu sayıya eşittir. b. 3M Petrifilm REC Plakasında toplam koliformlar için sayım aralığı, 100 koloniden az veya bu sayıya eşittir. c. E. coli veya toplam koliform için sayım aralığı, ayrı seyreltilerde görülebilir. Dairesel büyüme alanı, yaklaşık 30 cm 2 'dir. 100’den fazla koloni içeren 3M Petrifilm REC Plakalarında tahminler yapılabilir. Bir veya daha fazla temsili karedeki kolonileri sayın ve kare başına ortalama sayıyı belirleyin. Her 3M Petrifilm REC Plakası için hesaplanan sayıyı belirlemek üzere ortalama sayıyı 30 ile çarpın. 5. Sayılamayacak kadar çok (TNTC) sayıda koloninin bulunduğu 3M Petrifilm REC Plakaları, şu özelliklerden birine veya daha fazlasına sahip olabilir: jel renginin sarı olarak açılması, çok sayıda küçük, belirsiz kırmızı veya mavi koloni ve/veya çok sayıda kabarcık. Yüksek E. coli veya koliform konsantrasyonları, büyüme alanının dış kenarının pembe ile pembe turuncu arasında bir renge dönüşmesine neden olabilir. Böyle bir durumda, sonuçları TNTC olarak kaydedin. Daha doğru bir sayım için numunenin daha fazla seyreltilmesi gerekebilir.

3