OMB First to Final Action Recommendation Checklist 11-12-18

ERP - GLUTEN ASSAYS: AOAC 2015.05 FAR

hydrolyzation step led to a loss of epitopes. Except for the concentration below the LoQ, CVs were  around 10% and therefore acceptable. For detailed results see annex 2. 

Table 2. Mean concentrations, SD and recovery of six independent   extractions of partially‐hydrolyzed gliadin‐spiked syrup samples  Hydrolyzed gliadin (wheat) in syrup  spiked  mean*  SD  CV  recovery  mg/kg  mg/kg  mg/kg  %  %  30  16.3  1.72  10.5  54  21  12.1  1.25  10.3  58  16  9.58  1.06  11.0  60  12  7.11  0.57  8.0  59  9  6.90  0.60  8.7  77  6  5.67  0.44  7.8  95  3  1.84**  0.46  25.0  61  Blank  1.82  * blank corrected ** concentrations below standard 2 (5 mg/kg) were extrapolated using 2 nd  order polynomial function 3.2 Recovery and precision of spiked sourdough around 20 mg/kg (hydrolyzed) secalin  Purified secalin in sourdough  Results for sourdough spiked with intact secalin are depicted in table 3. As expected for an R5 antibody  containing ELISA, there is an overestimation of secalin. The fact of decreasing recoveries at lower  concentrations can be explained by (i) different affinities of the R5 antibody to the mixed calibrator of  hydrolyzed wheat, rye and barley and the pure secalin from rye and (ii) different kinetic behavior of  the hydrolyzed calibrator material compared to intact secalin which is quite larger in size. This leads to  non‐parallel curves of the calibrator material and the intact secalin, so that a non‐constant factor  between the two curves can be observed. Even for concentration at the LoQ the CV of 5.3% is quite  excellent. For detailed results see annex 3.  Table 3. Mean concentrations, SD and recovery of six independent   extractions of secalin‐spiked sourdough samples  secalin (rye) in  sourdough  spiked  mean*  SD  CV  rec  mg/kg  mg/kg  mg/kg  %  %  15  45.1  4.9  10.9  297  10  22.7  3.8  16.7  221  5  7.60  0.40  5.3  140  2.5  3.85**  0.20  5.3  130  Blank  0.59  * blank corrected ** concentrations below standard 2 (5 mg/kg) were extrapolated using 2 nd  order polynomial function

4 

5