OMB Meeting Book_9-11-14

各位专家：

对于 AOAC 2011.10 Vitamin B 12 in Infant Formula and Adult Nutritionals by HPLC ，液相 分离阶段，第一步使用体积排阻色谱（ size exclusion column ）初步分离 VB12 然后使用反相 色谱（ C18 column ）进一步分离，我们有如下意见： AOAC 2011.10 原始连接图如下：

在图 A 的阶段，由于等度泵（ isocratic pump ）使用的体积排阻色谱（ size exclusion column ） 在 1.1~1.2mL/min 流速下一般柱压比较小，而梯度泵（ gradient pump ）为了进一步的降低干 扰和提高灵敏度，使用的反相色谱（ C18 column ）是 3 μ m 的快速柱，在 1mL/min 的流速下 柱压一般比体积排阻色谱（ size exclusion column ）高。 在图 B 的阶段，体积排阻色谱（ size exclusion column ）直接与反相色谱（ C18 column ） 串联，而流速是 1.1~1.2mL/min ，这就相当于在体积排阻色谱（ size exclusion column ）后面 瞬间加入一个高于自身压力的柱后压。 当 VB12 从体积排阻色谱（ size exclusion column ）上全部转移到反相色谱（ C18 column ） 之后，需要再次切换到图 A 的阶段，这时候又相当于体积排阻色谱（ size exclusion column ） 后面瞬间降低一个高于自身压力的柱后压。 所以在每次分析的 30min 里，体积排阻色谱（ size exclusion column ）都要经过一个柱后 压力骤升和骤降的过程，长此以往，体积排阻色谱（ size exclusion column ）的寿命会有很大 的损伤。 而且在这个阶段体积排阻色谱（ size exclusion column ）本身柱压骤升，所以 VB12 的保 留行为与体积排阻色谱（ size exclusion column ）本身的保留时间已经不完全相符，同时，因 为在图 B 的阶段因为反相色谱（ C18 column ）后面没有连接检测器，所以对于确定 VB12 的保留时间需要进行估算，长时间做样品的时候，因为排阻色谱（ size exclusion column ）的 压力骤升骤降会导致 VB12 峰在一定周期内会有很大的漂移，然后需要经常更改阀切换时间 或者通过修改流速来确定 VB12 在阀切换周期内从排阻色谱（ size exclusion column ）上冲洗 下来，增加了液相色谱操作人员的专业要求及增加了工作量。 通过我们实验室的实验推敲过程，推荐如下设置：